1. Buffer 준비 : 반드시 0.22 um filter를 이용하여 filtering 후에 degassing 10-15분 하여 1 리터 이상 준비한다.
- Buffer의 조성에 Isopropyl alcohol, Glycerol 사용 불가. 유기용매와 viscosity가 높은 용액이 혼합된 buffer는 사용 불가하며, SEC column을 사용하기 때문에 특정한 condition을 제외한 일반적인 샘플을 실험할 경우에는 salt [e.g. NaCl]을 첨가 (150mM 이상)
2. 샘플 준비 : 예상 사이즈가 20 kDa 이상일 경우 2mg/ml 농도의 시료를 120 uL 준비 (100 uL injection)
예상 사이즈가 20 kDa 이하일 경우 10mg/ml 이상 시료 120 uL 준비 (100 uL injection)
- 농도가 낮을 시, MALS의 baseline이 많이 튀므로 정확한 값을 측정할 수 없음. 그러므로 샘플을 준비할 때, 높은 농도의 stock을 준비하는 것이 좋음. 또한 running buffer와 sample buffer는 동일한 조성을 사용.
주의사항 1 : Saccharide 및 고분자물질 인 경우 반드시 dn/dc값을 알아야함. (dn/dc 값 = 단위농도변화당 굴절률 변화값, 직접 농도를 바꿔가며 굴절계로 확인한거나 RI detector 혹은 Malvern사의 OMNISEC과 같은 기기로도 확인할 수 있음)
주의사항 2 : MALS 분석 기관이 가지고 있는 column들을 미리 확인하고, 각 column에서 분석할 수 있는 분자량과 입자 사이즈, pore 사이즈 등을 확인하여 column을 결정한다. (pH 제한이 있는 column도 있음)
대표적인 물질들의 dn/dc 값은 아래와 같다.
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